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消毒和滅菌是微生物實驗技術中最基本的操(cāo)作技術,因此從事藥品生產、檢驗的人員(yuán)均應了解消毒和滅菌的基本概念、兩者(zhě)的關係,各自(zì)的應用方法及其意義,操作時應嚴格執行相關的操作規程,一方麵確保生產與(yǔ)檢驗工作(zuò)的效果,另一方(fāng)麵也是(shì)對自身安全的保護。
消毒和滅菌的概念:
1、消毒:指對病原微生物(wù)的(de)繁殖體的致死作用,但不能殺死芽孢等全部微生物,因此消毒是不徹底的,不能代替滅菌。凡用於消毒的化學藥品稱為消毒劑,因此人(rén)們也常稱消毒劑為化學消(xiāo)毒劑。
2、滅菌:殺滅物體中所有活(huó)的微生物(含芽孢)的作(zuò)用,滅菌是采用強烈的理化因素使任(rèn)何物體內外部的一切微生物永遠(yuǎn)喪失其生長繁殖能力的措施。通常用物理方法來達到滅菌的目的。
二、消毒和滅菌的關係
1、共性:殺滅微生物以控製其(qí)汙染和防止傳播。
2、區別:
三、消毒和滅菌(jun1)的應用
1、消毒
1)消毒劑分類(lèi)
依殺滅微生物能(néng)力進行分類,有以下三種:
2)消毒劑的選擇
消毒劑的種類很多,性質不一,因此應根據實(shí)際需求選擇既安全又有效的消(xiāo)毒劑。在選擇時至少應考慮以下幾點:
3)消毒劑的使用
A、影響消(xiāo)毒效果的(de)因素
影響消毒劑效能的因素比(bǐ)較複雜,一般都因消毒劑的(de)種類(lèi)而異,因此各種(zhǒng)消毒(dú)劑使用(yòng)時應(yīng)注意以下因素
a)微生(shēng)物種類及數量
消(xiāo)毒劑(jì)的有(yǒu)效濃度(dù)及作用時間因微生物的種類及數量的不同而有差異,不同類(lèi)型的病原(yuán)微生物對消(xiāo)毒劑的抗力不(bú)同。對於細菌(jun1)繁殖體(tǐ)來說,革蘭氏陰性菌比革蘭氏陽性菌對消(xiāo)毒劑的耐受性強,尤其是銅綠假單胞菌的耐受性較強;芽孢的耐受力最強,在化學消毒(dú)劑中,戊二醛和過氧乙酸可殺滅芽孢,但其作用力不如熱力滅菌方法(fǎ);病毒(dú)對消毒因子的耐(nài)力也因其種類的不同(tóng)而(ér)有相當大的差異,親水病毒的耐力較親脂病毒要強;真菌對大多數化學藥物的耐受力(lì)較強,因此適用於細菌的消毒劑並不一(yī)定適用於真菌,但真菌一般耐熱性(xìng)較差。微(wēi)生物汙染(rǎn)數量多時,應加長消毒接觸時間、加大消毒劑用(yòng)量或提高消毒劑濃度。
b)溫度
一般來說,消毒的速度隨溫度的提高而加快,其殺菌作(zuò)用也相應增強。溫度影(yǐng)響的原理是(shì)其可影響菌體(tǐ)表麵和酶係統的活性,以及消毒劑的分子運動,使得消毒劑與(yǔ)菌細胞接觸的機會增加,從而使消毒的時(shí)間縮短。但溫度的變化對各種消毒(dú)劑的影響不同,如醇類和酚類一般受溫度影響較小,但如甲醛、環氧乙烷等溫度升高一倍時,其殺菌效果可增加十倍(bèi)。
c)濃度
消毒劑的濃度應考慮的是其主要成分的濃度,根據不同類型的消毒劑性(xìng)質,提高或降低濃度,均可顯著影響消毒效果。一般降低消毒劑的濃度需延(yán)長相應的消毒時間,且消毒劑內的有(yǒu)效成分在其保存期(qī)內(nèi)也會相應下降。
d)pH值
酸堿度常影響酸性(xìng)或堿性消毒劑的電離度,改變其溶解(jiě)度及分子結構,影響不(bú)同離子型消(xiāo)毒劑的作用,在堿性環境中(zhōng),細(xì)菌表麵負電荷增多,陽離子型消毒劑作用較強,在酸性環境中,細菌表麵負電荷減少,陰離子型消毒劑(jì)的殺菌效果較(jiào)好;另外pH的過高或過低(dī)對微生物的生長及表麵物理(lǐ)化學狀態均有影響。
e)有機物質
消(xiāo)毒環境中存在有機物,則(zé)其可在微生物表麵形成保護(hù)層阻礙消(xiāo)毒劑與微生物的接觸或延(yán)遲消毒(dú)劑的作用(yòng),可能導致微生物逐漸產生對藥物的適(shì)應(yīng)性,這些情況均會不同程度的降低消毒(dú)劑的消毒作用,如(rú)有機物(wù)可(kě)中和一部分消毒劑,有機物和消毒劑(jì)作用,形成溶解度比原來更低或殺菌(jun1)作用比原來更弱的化合物(wù)。一般來說消毒劑中的重(chóng)金屬類(lèi)及表麵(miàn)活(huó)化劑等受有機物的影響較大。
B、其他注意點
a)微生物對消毒劑的耐受性
一般來說,為了避免(miǎn)微生物對消(xiāo)毒(dú)劑的(de)耐受性,很多企業的消毒劑是輪換使用的,現今在學術界對於消毒(dú)劑的輪(lún)換使用的必要性尚存爭議(yì),但FDA的監管引文中主導(dǎo)應進行消毒劑輪換,但消毒劑的輪換使用周期應以曆史環境監測數據為基(jī)礎製訂。微生物對消毒劑的耐受性較抗生素要低一些(xiē),因(yīn)為消毒劑比抗生素有更強的殺菌作用。另外使用高濃度的消毒劑來殺滅少量(liàng)的(de)微生物通常影響不大,因此應考慮選擇(zé)合適的消毒劑來對抗不(bú)斷增強的耐受(shòu)性。同時建議定期進行試驗證明或評估從環(huán)境菌監測中分離出的微生物(含已知及(jí)新的類型)對該環境使用消毒劑的敏感性。
b)規範及安全使用
在消(xiāo)毒劑的(de)使用過程(chéng)中(zhōng),人員(yuán)培訓及是否規範及安全使用該消毒劑對其應用(yòng)有很大影響。接觸消毒劑(jì)的人員要求進行微生物、清(qīng)潔滅菌操作、消毒劑的製備/使用(yòng)/安(ān)全處理廢棄稀釋及濃縮消毒劑的培訓。如正(zhèng)確配製消毒劑是關鍵,很多消毒效果不佳或失敗的例(lì)子(zǐ)源於消毒劑的過度稀釋,另外(wài)用於無菌操作流程的消毒劑必須用(yòng)無菌水稀釋,一般稀釋用水推薦純化水及更高級別的水(shuǐ),因為水的硬度會影響一些消毒劑的功效。另外在處理可能產生有毒刺激性氣體、腐蝕(shí)性較強(qiáng)及濃度較大的消毒劑(如殺孢子劑)時,應配(pèi)備(bèi)適宜的安全防護裝備,如安全眼鏡、麵罩、過濾氣味的口罩、手套、防護服等。在消毒劑的使用同時應考慮清潔劑的配合(hé)使用,清潔是去除表麵顆粒及微(wēi)生物、去除殘(cán)留並提高後續消(xiāo)毒效果,因此清潔是為後續的消毒做好準備,同時(shí)規避前後2種(zhǒng)輪換消毒劑的互相作用。
2、滅菌
1)物理滅菌法
(1)熱力(lì)滅菌法 使(shǐ)用熱(rè)力滅菌法,在溫度和壓力等規定的滅菌條件下(xià),要達到一定的加(jiā)熱時間(jiān)。包(bāo)括:①火焰(yàn)滅菌法是利用火焰(yàn)加熱殺滅微生物的一種方法,適用於磁製品與金屬製品及在火焰(yàn)中不會破損的(de)物品;②幹熱(rè)滅菌法是利用幹熱空氣殺滅(miè)微生物的一種方法,適用(yòng)於耐熱、不耐濕的物品(pǐn),如玻璃器材、油劑類和(hé)幹粉(fěn)類等;③高壓蒸汽滅菌法是利用適當(dāng)溫度和壓力的飽和水蒸氣加熱殺滅微生物的一種方法,適(shì)用於耐高(gāo)溫高壓水蒸氣的物品的滅菌;④流通蒸汽滅菌法適用於有(yǒu)變質危險的物品;⑤煮沸滅菌法(fǎ)是(shì)利用沉沒(méi)在沸騰水中加熱(rè)殺(shā)滅微生物(wù)的一種方法,煮沸時間應在15分鍾以上;⑥間歇滅(miè)菌法利用80℃~100℃水(shuǐ)或流通水蒸氣,24小時(shí)為一周期,每隔30~60分鍾反複加熱3~5次,適用於橡膠品、培養基(jī)、試驗用藥品、液體等。
(2)過濾滅菌法 過濾滅菌法是用篩除或濾材吸附等物理方式除去微生物,是一種常用的滅菌方法,適用於不(bú)能受(shòu)熱的(de)物品,如含有可(kě)溶性或不穩(wěn)定物(wù)質的培養基、試驗液體和(hé)液狀醫藥品等,過濾法的最大(dà)缺點是不能濾除病毒。
(3)照射滅菌法 ①放射線滅菌法是包括放(fàng)射性同位素在內(nèi),利用從放射源產生(shēng)射線進行照射,是殺滅微生物的一種方法,適(shì)用於玻璃製品(pǐn)、磁製品、金屬製品、橡膠製(zhì)品、塑(sù)料製品與纖維製品等耐受放射(shè)線照射的物品;②紫外線(xiàn)滅菌法是利用照射紫外線殺滅微生物的一種方法,適用於玻璃(lí)製品、金屬製品、橡膠製品、塑料製品和纖維製品等,還可用於設施、設(shè)備、水或醫藥品等。
2)化學滅菌法
(1)氣體滅菌法 氣體滅菌(jun1)法是利用環氧乙烷或甲(jiǎ)醛滅殺微生物的一種方法,主要用於玻(bō)璃製品、磁製品、金屬製(zhì)品、橡膠製品、塑料(liào)製品、纖(xiān)維製品等,還可用於設施、設備或粉末狀的(de)醫藥品等。使(shǐ)用氣體滅(miè)菌時(shí),其被(bèi)滅菌的物品以未(wèi)變質為前提條件。
(2)藥液滅菌法 通常使用的藥液有乙醇、甲酚、苯酚(fēn)水或福爾馬林水等,適(shì)用於玻璃製品、磁(cí)製(zhì)品(pǐn)、金屬製品、橡膠(jiāo)製品、塑料製品、纖維製品等物品,還可用於手(shǒu)指、無菌箱或無菌設備等。
3)高壓蒸汽滅菌法
(1)需要滅菌的各種包裹不應過(guò)大、過緊,不要排得太密集,以免(miǎn)影響滅菌效(xiào)果。
(2)包(bāo)內和包(bāo)外各貼一條滅菌指示帶(長6~8cm),如壓力達到範圍時,指示紙帶上即出現黑色條紋,表示已達滅菌的要求。
(3)易燃和易爆炸物品如碘仿、苯類等,禁用高壓蒸汽滅菌法;銳(ruì)利器械如(rú)刀、剪不宜(yí)用(yòng)此法滅菌(jun1),以(yǐ)免變鈍。
(4)瓶裝液體滅菌時(shí),要用玻璃紙(zhǐ)和紗布包紮瓶口,如用橡皮塞的,應插入針頭排氣。
(5)要有專人負責,每次(cì)滅菌前,應檢查安全閥的性能是否良好,以防鍋內壓力過高,發生爆炸。
4)個人防護
(1)熱力滅菌 幹熱滅菌時(shí)應防止燃燒;壓力蒸汽滅菌應防止發生爆炸事故及可能對操作人員造成的灼傷事故(gù)。
(2)紫外線、微波消毒 應(yīng)避免對人(rén)體的直接照射。
(3)氣體化學消毒劑 應防止有毒有(yǒu)害消毒(dú)氣體的泄漏,經常檢測(cè)消毒環境中該(gāi)類氣體的濃度,確(què)保在國家(jiā)規定的安全範圍之內;對環氧(yǎng)乙烷氣體消毒劑,還應嚴防發生燃燒和爆(bào)炸事故。
(4)液體化學消毒劑 應防止過敏和可能對皮膚、黏膜(mó)的損傷。
(5)處理銳利器械和用具 應采取有效防護措施(shī),以避免可能對人體的刺、割等傷害。
5)其他
已滅菌的物品應做記號(hào),以便(biàn)識別,並需與未滅(miè)菌的物品分開放置,以免弄錯(cuò)。
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